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Cell이 얼마나 필요한가요? Adhesion cell을
96-well plate에서 테스트할 경우 1,000 cells/100ul 정도면 됩니다.
384-well에서도 측정 가능한가요? 물론 가능합니다. 하지만, 한 well에 들어가는 media 양이 적어서 10% 분량의 CCK-8을 첨가하기가 쉽지 않을 것입니다. 이런 경우엔, CCK-8을 media로 50% 희석시킨 것을 두 배로 넣어주는 방법을 추천 드립니다.
CCK-8은 세포 표면도 염색시키나요? 아니요. CCK-8의 주 원료는 수용성인 WST-8 (Water Soluble Tetrazolium salt) 입니다. electron mediator인 1-Methoxy PMS가 세포로부터 electron을 받아 WST-8으로 전달하면 formazan dye가 형성되는데, 이 역시도 수용성입니다. 따라서 세포 표면이 염색되는 일은 전혀 없습니다.
배지 성분 중의 phenol red가 반응에 영향을 주나요? 아니요. 배지만 첨가한 well을 측정한 값을 빼 줌으로써, 배지 자체의 영향을 제거할 수 있습니다.
CCK-8 측정 결과는 Thymidine incorporation assay 결과와 correlation이 있나요? 물론입니다. 하지만, 두 assay는 서로 다른 메커니즘을 이용한 측정방식이기 때문에, 측정하는 세포주에 따라 다소 차이가 날 수도 있습니다.
CCK-8은 세포독성이 있나요? electron mediator인 1-Methoxy PMS가 고농도로 들어있어 CCK-8 원액 자체로는 세포독성이 있습니다. 하지만, 배지에 1/10 농도로 희석되면 독성이 거의 사라집니다. 따라서 overnight, 심지어 수일간도 측정이 가능합니다. 게다가 CCK-8 측정이 끝난 세포를 가지고 crystal violet assay, neutral red assay, DNA fluorometric assay 등 후속 실험을 진행할 수도 있습니다.
CCK-8의 stability는 어느 정도인가요? 상온 6개월, 냉장에서 1년, -20℃에서 2년 이상입니다.
450 nm filter가 없는데, 다른 filter 사용해도 되나요? 450 nm에서 490 nm 사이의 filter면 사용 가능합니다. |
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CCK-8 홍보 동영상 Assay
비교자료
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